當前位置:主頁 > 技術文章 > 聊聊ATCC細胞的培養試劑分析

聊聊ATCC細胞的培養試劑分析

時間:2022-07-27 點擊次數:58
  ATCC細胞在培養瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續生長,同時也將細胞數量擴大,就必須進行傳代(再培養)。傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。
  ATCC細胞的培養試劑分析:
  一、紡錘體阻斷劑
  在有絲分裂過程中,隨著紡錘絲的形成,染色體被牽引到一起難以觀察其形態。紡錘體的形成在于細胞質和紡錘體成分的粘度之間的平衡,因此,改變細胞質的粘度,即可破壞紡錘體形成,從而使得染色體均勻散開,且染色體縊痕區更為清楚。
  在培養中使用的紡錘體阻斷劑為秋水仙素,在終止培養前加入適量秋水仙素,使正在分裂的細胞停留在中期,以獲得大量分裂相供分析之用。秋水仙素的濃度范圍比較寬,一般使用濃度0.05-0.8微克/毫升,在終止培養前處理2-4小時。但在實際工作中需要借助濃度和處理時間來控制染色體的收縮程度。秋水仙素作用時間越長,被阻斷的中期分裂相越多,但是染色體也越凝聚和收縮,所以還視各實驗室經驗而定。
  二、ATCC細胞低滲液
  低滲液是指滲透壓和離子強度均低于正常細胞生理條件的溶液,如水、低滲的檸檬酸鈉或氯化鈉、甘油磷酸鉀(0.65M)、KCl(0.075M)等。低滲效果取決于低滲液的化學組成、低滲的溫度和處理時間。低滲處理是憑借反滲透作用使細胞膨脹染色體鋪展,同時可使粘附于染色體的核仁物質散開,以便能在一個平面上觀察所有染色體形態。實驗室中一般選用0.075MKCl為低滲液(具體情況取決于實際操作,鑒于實驗的連續性和穩定性,本實驗室采用0.35%KCl),其優點有:
  1.染色體輪廓清楚,可染色性強,染色時間短。
  2.用于顯帶染色時能充分顯示帶型特點。低滲處理為37℃,15-25分鐘,以預實驗條件為準。
  三、固定液
  固定液的重要特性是能迅速穿透細胞,將其固定并維持染色體結構的完整性,還要能夠增強染色體的嗜堿性,達到優良染色效果。單純的固定液一般難以達到這些要求,因此在實驗中使用兩種混和的固定液。
  Carnoy固定液(甲醇:冰乙酸=3:l)每次使用前需臨時配制,長時間放置影響固定效果,固定時間15分鐘至24小時,冰箱、室溫均可。必要時可改變甲醇和冰乙酸的比例,冰乙酸比例增加,利于細胞膨脹、染色體鋪展,但易導致細胞破裂、染色體散失。
  四、滴片
  滴片使ATCC細胞懸液從一定高處落在載玻片上,淋巴母細胞膜破裂,染色體分散開。載玻片可用冰片和干片,效果均好。滴片后需空氣干燥。
  五、Giemsa染色
  Giemsa染料不是一種單一染料,而是天青、伊紅、甘油和甲醇的混合物,配制后原液儲存。在常規染色中,并不比其他染料優越,但在顯帶技術中,卻是*的。
  Giemsa工作液在使用前臨時配制,濃度可在2.5-10%之間(原液2份加pH7.4磷酸緩沖液10-40份)。染色后,染色質呈紅色,細胞核是藍色。

版權所有 © 2022 上海銘博生物科技有限公司 備案號:滬ICP備15037298號-1 技術支持:化工儀器網 管理登陸 sitemap.xml

點擊咨詢 聯系方式 二維碼

服務熱線

021-55825868

掃一掃,關注我們

专区国产精品第一页|欧美日韩在线精品视频|91亚洲国产亚洲|大荫蒂视频欧美另类xx