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細胞逆轉錄酶(REVERSE TRANSCRIPTASE)活性熒光定量
時間:2021/3/10 點擊次數:865

MB50353.1 v.A

 

  細胞逆轉錄酶(REVERSE TRANSCRIPTASE)活性熒光定量檢測試劑盒

產品說明書(中文版)

 

主要用途

 

  細胞逆轉錄酶(REVERSE TRANSCRIPTASE活性熒光定量檢測試劑是一種旨在通過雙鏈分子底物,在dTTP的參與下,通過逆轉錄酶的催化,聚合產生RNA-DNA異源雙鏈DNA分子,由PicoGreen特異染色,即采用熒光法來測定細胞裂解樣品中酶活性*而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細胞裂解懸液樣品(動物、人體、昆蟲等)逆轉錄酶的活性,以及抑制劑檢測。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩定。

 

技術背景

 

逆轉錄酶(REVERSE TRANSCRIPTASE;EC2.7.7.49),又稱為RNA依賴性DNA聚合酶(RNA-dependent DNA polymerase),是將單鏈RNA分子轉錄為雙鏈DNADNA聚合酶,包括HIV逆轉錄酶、莫洛尼氏鼠白血病病毒(Moloney murine leukemia virus;MMLV)逆轉錄酶、禽類成髓細胞瘤病毒(avian myeloblastosis virus;AMV)逆轉錄酶、端粒酶逆轉錄酶(telomerase reverse transcriptase) 等。逆轉錄病毒使用逆轉錄酶達到逆轉錄RNADNA,然后整合到宿主基因組再復制。在真核生物中,端粒酶是一種逆轉錄酶。逆轉錄酶在分子生物學中得到廣泛運用。檢測逆轉錄酶活性成為病毒感染的監測手段,同時作為藥物篩選的靶標。基于poly-A模板與oligo-dT引物構成的雙鏈分子底物,在dTTP的參與下,通過逆轉錄酶的催化,聚合產生RNA-DNA異源雙鏈DNA分子(heteroduplexes),由PicoGreen特異染色,根據熒光強度分析(激發波長480nm,散發波長520nm),來定量測定逆轉錄酶的活性。 

 

產品內容

 

  清理液(Reagent A 毫升

  裂解液(Reagent B 毫升

  緩沖液(Reagent C 毫升

  底物液(Reagent D 微升

  終止液(Reagent E 微升

  染色液(Reagent F 微升

  稀釋液(Reagent G 毫升

  標準液(Reagent H 微升

產品說明書    1

 

保存方式

 

保存  清理液(Reagent A4冰箱里;其余的保存在-20冰箱里;  染色液(Reagent F避免光照;有效保證6

 

 

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管:用于樣品保存的容器

15毫升錐形離心管:用于樣品制備的容器

細胞刮脫棒:用于細胞脫離

DOUNCE勻漿器:用于裂解組織

臺式離心機:用于樣品操作

比色皿或酶標板:用于熒光分析的容器

熒光分光光度儀或熒光酶標儀:用于熒光分析

 

實驗步驟

 

實驗開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的  裂解液(Reagent B置入冰槽里融化。然后進行下列操作。

 

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