鈉鉀泵（Na/K pump；Na/K ATPase）功能紅色熒光檢測試劑盒產品說明書
（中文版）
主要用途
鈉鉀泵（Na/K pump；Na/K ATPase）功能紅色熒光檢測試劑是一種旨在通過電變色苯乙烯熒光探針，應對膜性囊泡產生電位梯度變化，而產生熒光變化，來分析和觀察鈉鉀離子轉運功能，進一步評價P型ATP酶中的Na+-K+ ATP酶功能的*而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物、人體等細胞鈉鉀離子轉運活性，即P型ATP酶的Na+-K+ ATP酶功能的檢測，以及抑制劑篩選。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。
技術背景
細胞膜上的膜整合蛋白（integral membrane protein）參與細胞內外的物質傳輸、能量產生與轉化等生物學過程，構成離子或代謝分子的通道，常見的包括氫離子、鈉離子、鉀離子等電解質，在能量依賴型或非依賴型的條件下，完成生理代謝的物質交換。膜通道轉運功能檢測（transport或uptake assay）用于分析轉運蛋白（transport protein）和底物（substrate）的功能、篩選通道抑制劑、進而發現藥物以及抗藥性機制。建立分子構建的載體或宿主模型、分離膜性囊泡（membrane vesicle）包括正常外向膜性囊泡（Right-side out；RSOV）或內側外翻膜性囊泡（In-side out；IOV），通過標記底物的轉運，來定量測定轉運活性。鈉/鉀ATP酶（Na＋/K＋-ATPase；EC3.6.1.3），是五類ATP酶（F、V、A、P和E型）中P型ATP酶（P type ATPase）之一。ATP酶催化三磷酸腺苷分解為二磷酸腺苷和無機磷。這一去磷酸化反應釋放出能量，成為細胞生命代謝的能源。ATP酶為跨膜蛋白（transmembrane），幫助傳輸各種代謝分子進出細胞。P型ATP酶，又稱為E1-E2 ATP酶，通常由一條或兩條多肽構成，且呈現兩種主要的結構構象E1和E2。這類ATP酶存在于細菌和真核細胞膜和細胞器上，其功能在于水解ATP獲得能量，跨膜運輸各種化學分子（post albers cycle）。P型ATP酶可以分成4種，Ca2+傳輸性、Na+-K+ /H+-K+傳輸性、H+傳輸性和所有細菌型等。其中鈉/鉀ATP酶，又稱為鈉鉀泵或鈉泵（Na+-K+ pump），是一種電致（electrogenic）膜蛋白。細胞排（3分子）鈉吸（2分子）鉀時，細胞膜兩邊無電荷流動，并建立細胞內外離子（胞內低鈉、胞外高鉀）濃度平衡，維持細胞靜態膜電位（電化學電位梯度），控制細胞容量，調節pH，調節神經和肌肉興奮性，以及碳水化合物、氨基酸和維生素的攝入等。鈉/鉀ATP酶是心臟病的重要藥物靶標。通過使用電變色苯乙烯熒光探針RH421，為膜電壓敏感性兩性離子染料，在鈉/鉀ATP酶和ATP的存在下，產生電化學電位梯度，使紅色熒光發生升高或降低的變化（激發波長580nm，散發波長670nm），以分析轉運蛋白P型ATP酶中Na＋/K＋ ATP酶的功能，以及其抑制劑的篩選。
產品內容
緩沖液（Reagent A） 毫升
染色液（Reagent B） 微升
反應液（Reagent C） 毫升
補充液（Reagent D） 毫升
產品說明書 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，避免光照；有效保證6月
用戶自備
恒溫水槽或培養箱：用于反應孵育
500微升比色皿：用于熒光分析的容器
熒光分光光度儀：用于熒光定量分析
實驗步驟
一、 樣品準備
1． 確定測定對象：動物/人體細胞
2． 分離膜性囊泡（注意：建議使用 系列分離試劑盒產品）
3． 準備好待測的分離樣品，并測定鈉/鉀ATP酶活性
4． 置于冰槽里備用
