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鈉鉀泵(Na/K pump;Na/K ATPase)功能紅色熒光
時間:2021/10/20 點擊次數:975

鈉鉀泵(Na/K pump;Na/K ATPase)功能紅色熒光檢測試劑盒產品說明書

(中文版)

 

主要用途

 

   鈉鉀泵(Na/K pump;Na/K ATPase)功能紅色熒光檢測試劑是一種旨在通過電變色苯乙烯熒光探針,應對膜性囊泡產生電位梯度變化,而產生熒光變化,來分析和觀察鈉鉀離子轉運功能,進一步評價PATP酶中的Na+-K+ ATP功能的*而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物、人體等細胞鈉鉀離子轉運活性,即PATP酶的Na+-K+ ATP酶功能的檢測,以及抑制劑篩選。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩定。

 

技術背景

 

細胞膜上的膜整合蛋白(integral membrane protein)參與細胞內外的物質傳輸、能量產生與轉化等生物學過程,構成離子或代謝分子的通道,常見的包括氫離子、鈉離子、鉀離子等電解質,在能量依賴型或非依賴型的條件下,完成生理代謝的物質交換。膜通道轉運功能檢測(transportuptake assay)用于分析轉運蛋白(transport protein)和底物(substrate)的功能、篩選通道抑制劑、進而發現藥物以及抗藥性機制。建立分子構建的載體或宿主模型、分離膜性囊泡(membrane vesicle)包括正常外向膜性囊泡(Right-side out;RSOV)或內側外翻膜性囊泡(In-side out;IOV),通過標記底物的轉運,來定量測定轉運活性。/ATP酶(Na/K-ATPase;EC3.6.1.3),是五類ATPF、V、A、PE型)中PATP酶(P type ATPase)之一。ATP酶催化三磷酸腺苷分解為二磷酸腺苷和無機磷。這一去磷酸化反應釋放出能量,成為細胞生命代謝的能源。ATP酶為跨膜蛋白(transmembrane),幫助傳輸各種代謝分子進出細胞。PATP酶,又稱為E1-E2 ATP酶,通常由一條或兩條多肽構成,且呈現兩種主要的結構構象E1E2。這類ATP酶存在于細菌和真核細胞膜和細胞器上,其功能在于水解ATP獲得能量,跨膜運輸各種化學分子(post albers cycle。PATP酶可以分成4種,Ca2+傳輸性、Na+-K+ /H+-K+傳輸性、H+傳輸性和所有細菌型等。其中鈉/ATP,又稱為鈉鉀泵或鈉泵(Na+-K+ pump),是一種電致(electrogenic)膜蛋白。細胞排3分子)鈉吸2分子)鉀時,細胞膜兩邊無電荷流動,并建立細胞內外離子(胞內低鈉、胞外高鉀)濃度平衡,維持細胞靜態膜電位(電化學電位梯度),控制細胞容量,調節pH,調節神經和肌肉興奮性,以及碳水化合物、氨基酸和維生素的攝入等。鈉/ATP是心臟病的重要藥物靶標。通過使用電變色苯乙烯熒光探針RH421,為膜電壓敏感性兩性離子染料,在/ATP酶和ATP的存在下,產生電化學電位梯度,使色熒光發生升高或降低的變化激發波長580nm,散發波長670nm,以分析轉運蛋白PATP酶中Na/K ATP的功能,以及其抑制劑的篩選。  

 

產品內容

 

   緩沖液(Reagent A        毫升

   染色液(Reagent B        

   反應液(Reagent C        毫升

   補充液(Reagent D        毫升

產品說明書           1

 

 

保存方式

 

保存在-20℃冰箱里,避免光照;有效保證6

 

用戶自備

 

恒溫水槽或培養箱:用于反應孵育

500升比色皿:用于熒光分析的容器

熒光分光光度儀:用于熒光定量分析

 

實驗步驟

 

一、 樣品準備

 

1. 確定測定對象:動物/人體細胞

2. 分離膜性囊泡(注意:建議使用   系列分離試劑盒產品)

3. 準備好待測的分離樣品,并測定鈉/ATP活性

4. 置于冰槽里備用


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