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Elisa試劑盒在實驗時的哪些誤差該如何避免?

時間:2021-11-20 點擊次數:418
  我們平時在Elisa試劑盒實驗的時候總是會出現一些誤差,那么在Elisa試劑盒實驗前我們該如何避免這些誤區呢?在Elisa試劑盒實驗前我們又有哪些需要注意事項呢?
  1、仔細閱讀說明書;
  2、確定試劑盒在有效期內;
  3、按說明書確定所有試劑齊全(數量、體積);
  4、標本制備要規范,每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內無法實驗者,注意低溫保存;
  5、準備好所有實驗額外所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機等;
  6、根據檢測標本數量確定所需試劑的量;
  7、按說明書將所用試劑平衡至室溫,配制所需試劑。
  Elisa試劑盒試驗時,我們需要注意事項如下:
  1.正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
  2.在Elisa試劑盒實驗中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
 ?。?)固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。
 ?。?)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的濃度需進行滴定:Elisa試劑盒即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。

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